为度生物乳胶微球偶联工艺推荐

在生化试剂全国集采加速推进的背景下，加快原料国产替代进程，进一步降本增效成为了试剂厂商的迫切需求。乳胶微球是生化试剂的核心原料，为度生物作为国内领先的微球制造商，可以提供粒径范围分布在80nm-400nm的乳胶微球，且具有粒径均一、批间差小，功能基团充足且稳定可控等特点。基于vdo乳胶微球的特性，我们研发出与之匹配的高效偶联工艺，助力客户快速开发高灵敏度且性能稳定的生化试剂。

一、为度生物乳胶微球偶联工艺推荐

1. 缓冲液配制

1.1 微球稀释液：10mm mes，350mm氯化钠，ph 6.0；

1.2 抗体稀释液：50mm 硼酸，350mm氯化钠，ph 8.0；

1.3 edc溶液：5mg/ml的edc溶液，用去离子水配制，现配现用；

1.4 nhs溶液：5mg/ml的nhs溶液，用去离子水配制，现配现用；

1.5 封闭液：200mm 甘氨酸缓冲液，20%bsa；

1.6 r2保存液：20mm taps，5% 蔗糖，0.5% bsa，0.1% proclin 300，ph8.0；

2. 偶联流程

（该流程可用于将0.6mg抗体偶联到8mg微球上，具体的微球用量、抗体用量、缓冲液ph值和edc投入量需根据实际情况进行优化。）

2.1微球稀释：取 920μl微球稀释液于5ml烧杯中（含有转子），加入80μl微球（固含10%），置于磁力搅拌器上，充分混匀10min；

2.2 活化：在磁力搅拌状态下，逐滴加入32μl nhs溶液，充分混匀，再逐滴加入16

μl edc溶液，室温活化15min；

2.3 微球与抗体偶联：取0.6mg抗体，用抗体稀释液稀释至1ml。在磁力搅拌状态下，将其逐滴加入上述2.2步骤活化后的微球中，室温偶联2.5h；

2.4 封闭：在磁力搅拌状态下，加入160μl封闭液，室温封闭1h；

2.5 反应结束后，在10000×g下，离心10min；

（注：离心力和离心时间需根据球的粒径大小来调整。若微球的粒径大，可适当减少离心力和离心时间，使微球全部沉淀，上清液为透明液体即可。）

2.6 去除上清液，加入4ml r2保存液。用超声细胞破碎机进行超声，设置功率30%（~300w），超声3s/间隙3s，超声总时间2min。

二、乳胶微球验证数据

基于上述乳胶微球偶联工艺，我们在胱抑素c（cysc）项目上做了与进口微球反应性对比验证、更换不同抗体后的反应性验证以及批间重复性验证。实验数据展示如下：

1、 反应性对比

在cysc项目上，对比vdo 100nm乳胶微球（货号：ps0100cha）和竞品j 品牌100nm乳胶微球的反应性。

结果显示： vdo乳胶微球与同粒径竞品j微球相比，具有更好的反应性。

2、 更换不同抗体后反应性验

将同一批次的vdo 100nm乳胶微球（货号：ps0100cha），在相同的偶联工艺下，通过更换不同品牌的抗体，做反应性验证，并与成品试剂对比。

结果显示：相同的微球偶联工艺下，使用不同厂家的抗体，vdo乳胶微球所制备的试剂反应性均高于对照成品试剂。

3、 批间重复性

随机选取三个批次的vdo 120nm 乳胶微球（货号：ps0120cha），在cysc项目上进行反应性测试。

                                

结果显示：vdo乳胶微球具有良好的批间重复性。

三、常见问题

1.当抗体的厂家、种类或微球的粒径更换后，上述偶联工艺可能出现不匹配的现象，导致偶联后的试剂灵敏度、线性、稳定性无法满足要求，若出现类似的情况，可从以下几点进行优化：

（1）重新摸索微球、抗体、活化剂的量，从而筛选出优条件。

（2）改变抗体稀释液的种类或ph值，如：将抗体稀释液改为mes、mops等缓冲液 。

2.出现聚集现象：

（1）加入活化剂后出现聚集，可通过减少活化剂的量、调整微球稀释液ph值进行优化。

（2）加入抗体后出现聚集，可通过调整微球稀释液浓度或ph值、更换抗体稀释液的种类和ph值等条件进行优化。

四、乳胶微球订购信息：